Детекция и удаление микоплазм

Смесь антибиотиков для предотвращения контаминации клеточных культур бактериями и грибами (в т.ч. дрожжи); 10000 ЕД/мл пенициллина, 10 мг/мл стрептомицина, 25 мкг/мл амфотерицина.

Заражение микоплазмой стало очень важной проблемой в культуре клеток, так как вызывает негативные последствия для всех аспектов клеток. Поэтому очень важно регулярно выявлять микоплазменное заражение. Данный набор для обнаружения микоплазм использует метод ПЦР для специфического обнаружения микоплазменного заражения в различных биологических материалах культивируемых клеток (таких как клеточные культуры, выделения экспериментальных животных, сыворотка животных и т.д.). Смешанные праймеры, используемые в наборе, являются специфическими праймерами, предназначенными для консервативной области последовательности 16S рРНК Mycoplasma. Специфическая ПЦР-амплификация ДНК Mycoplasma может быть завершена в течение одного часа с использованием соответствующей смеси для ПЦР Mycoplasma (2×) с использованием раствора клеточной культуры в качестве шаблона для ПЦР. Этот набор обладает высокой чувствительностью и позволяет обнаружить 20 копий микоплазмы.

Состав

• Шаблон (раствор клеточных культур), мкл — 1;
• смесь праймеров для микоплазмы, мкл — 2;
• смесь для ПЦР микоплазмы (2×), мкл — 10;
• вода свободная от микоплазм, мкл — до 20.

Набор для детекции микоплазм основан на активности специфического фермента микоплазмы. Данный фермент превращает АДФ в АТФ в процессе расщепления специфического субстрата. Люцифераза в присутствии АТФ катализирует реакцию окисления люциферина, что вызывает биолюминесценцию, измерение которой с помощью люминометра позволяет определить присутствие микоплазменной инфекции в тестируемой пробе.

Работа с набором для детекции микоплазм G1901-20T довольно проста и содержит два шага, занимающих примерно 15 мин. Детекция микоплазм методом хемилюминесценции точнее, чем с помощью метода ПЦР, поскольку при хемилюминесценции можно выявить микоплазмы с реальной биологической активностью.

При применении набора рекомендуется использовать белые или черные непрозрачные планшеты, поскольку в обычных прозрачных планшетах в соседних лунках могут возникать помехи.

Состав набора

• Реагент A для детекции микоплазмы, мл — 1;
• реагент B для детекции микоплазмы, мл — 1.

Набор G1902-50 позволяет быстро в один этап обнаружить 8 видов микоплазм в культуральной среде методом изотермической амплификации и визуального изменения цвета без выделения ДНК, использования ДНК-амплификаторов или электрофореза.

Суть метода заключается в следующем: в реакционный раствор добавляется 1 мкл супернатанта клеточной культуры и инкубируется 30 минут при 65°C. При отсутствии микоплазм в образце цвет реакционной смеси будет желтым, а при загрязнении микоплазмой — розовым.

По сравнению с традиционным методом ПЦР, данный набор выделяется простотой использования, повышенной чувствительностью и способностью справляться с различными ингибиторами ПЦР в культурной среде, что исключает возможность ложноотрицательных результатов и обеспечивает сопоставимость с ПЦР в реальном времени.

Состав набора

• Буфер Mycored, мкл — 1,2;
• фермент Mycored, мкл — 50;
• контроль положительный, мкл — 50;
• масло парафиновое, мл — 1.

Myco-BlueTM Mycoplasma Detector — это реагент для быстрого обнаружения контаминации микоплазмами в клеточных культурах с помощью изотермальной ПЦР. Просто добавьте 1 мкл супернатанта клеточной культуры в реакционную систему и инкубируйте при 60 °C в течение 1 часа. При наличии микоплазмы раствор изменит цвет реакционного раствора с фиолетового на небесно-голубой, что можно оценить визуально. Нет необходимости в дополнительном оборудовании, набор может быть использован для ежедневного мониторинга микоплазмы в биофармацевтических компаниях, при производстве вакцин, моноклональных антител, в лабораториях клеточной терапии и научно-исследовательских институтах.

Хранить при -20 °C.

Набор SweMyco-1+2 включает в себя комбинацию антибиотиков хинолонового, тетрациклинового и макролидного ряда, способные эффективно уничтожать микоплазму, ингибируя у нее репликацию ДНК и синтез белков. Оптимизированный состав набора обеспечивает низкую цитотоксичность и быстрое разрушение микоплазмы в течение 7-10 дней.

Набор был успешно протестирован на различных клеточных линиях, инфицированных микоплазмой, однако чувствительность к реагентам может варьироваться в зависимости от типа клеточной линии. В случае высокой цитотоксичности или недостаточной эффективности удаления микоплазмы рекомендуется корректировать концентрацию продукта или время его воздействия.

Состав набора

• Реагент элиминации SweMyco-1 (100×) — 5×1 мл;
• реагент элиминации SweMyco-2 (100×) — 5×1 мл.

Таблица сравнения продуктов Servicebio для удаления микоплазм

	Реагент для удаления микоплазм, 100x, 10x1 мл	Реагент для удаления микоплазм Reagent Plus, 100×, 10×1 мл	Набор для удаления микоплазм в клеточной культуре SweMyco-1+2, 100х, 5х1 мл
Артикул	G4006-10ML	G4007-10ML	G4008-5ML
Антибиотики	Хинолоны, тетрациклины	Хинолоны, тетрациклины, макролиды	Хинолоны, тетрациклины, макролиды
Относительная токсичность	Средняя	Высокая	Низкая
Относительная скорость разрушения микоплазмы	10 дней	5-7 дней	7-10 дней

Реагент используется для проведения профилактических мер от микоплазмы и представляет собой готовый к применению продукт, содержащий комбинацию из 3-х групп антибиотиков: хинолоны, тетрациклины и макролиды, эффективные в блокировании репликации ДНК и препятствовании синтезу белков микоплазмы.

Данный реагент обеспечивает эффективную защиту от микоплазм при культивировании клеток и имеет положительное воздействие на препятствие роста многих грамположительных и грамотрицательных бактерий. В рутинной лабораторной практике реагент возможно применять, если возникла проблема с устойчивостью микоплазм к традиционным антибиотикам, таким как пенициллиновые или стрептомициновые препараты, или если важна профилактика микоплазмы без нарушения роста клеточных культур.

Этот реагент представляет собой комбинацию хинолонов, тетрациклинов и макролидов, которые подавляют репликацию ДНК и синтез белка микоплазмы, что позволяет эффективно удалять микоплазму. Данный реагент может полностью удалить микоплазму из инфицированных клеток в течение 5-7 дней. После смены среды клетки находятся в хорошем состоянии, и в непрерывной многопоколенной культуре не наблюдается феномен отторжения.

Состав

• Реагент для элиминации Reagent Plus (100×), мл — 10×1;
• руководство по эксплуатации, шт. — 1.

Таблица сравнения продуктов Servicebio для удаления микоплазм

	Реагент для удаления микоплазм, 100x, 10x1 мл	Реагент для удаления микоплазм Reagent Plus, 100×, 10×1 мл	Набор для удаления микоплазм в клеточной культуре SweMyco-1+2, 100х, 5х1 мл
Артикул	G4006-10ML	G4007-10ML	G4008-5ML
Антибиотики	Хинолоны, тетрациклины	Хинолоны, тетрациклины, макролиды	Хинолоны, тетрациклины, макролиды
Относительная токсичность	Средняя	Высокая	Низкая
Относительная скорость разрушения микоплазмы	10 дней	5-7 дней	7-10 дней