Выделение и очистка нуклеиновых кислот

Ингибитор РНКаз RiBond ингибирует рибонуклеазную активность эукариотических ферментов, таких как РНКаза A, РНКаза B, РНКаза C, и защищает РНК от неспецифического гидролиза. Представляет собой рекомбинантный белок массой 50 кДа, экспрессируемый в E.coli, предназначен для использования в приложениях, где присутствие РНКаз может снизить качество результатов экспериментов, например при выделении РНК, синтезе кДНК, ОТ-ПЦР, транскрипции и трансляции in vitro.

Условия хранения: -20 °С.

Рибонуклеазы (РНКазы) — большая группа гидролитических ферментов, способных расщеплять молекулы рибонуклеиновой кислоты. Это нуклеазы, катализирующие распад РНК на мелкие компоненты. Рибонуклеаза А является пищеварительным ферментом, секретируемым поджелудочной железой коров, который специфически «переваривает» или гидролизует полимеры РНК (но не ДНК) путем расщепления эндонуклеазой фосфодиэфирных связей, образующих ковалентные связи между соседними рибонуклеотидными остатками в этих молекулах.

РНКаза А (рибонуклеаза А) — это фермент высокого качества, способный разделять одноцепочечную РНК по цитозиновым и урациловым остаткам.

Применяется для удаления РНК во время процедур выделения плазмидной и геномной ДНК.

Эндонуклеаза этого типа может расщеплять фосфодиэфирную связь между 5'-рибозой нуклеозида и фосфатной группой 3'-рибозы соседнего пиримидиннуклеозида, результатом этой реакции является получение 3'-пиримидинмононуклеотида или олигонуклеотида, оканчивающегося на 3'-пиримидиннуклеотид.

Буква «А» в названии относится не к его субстратной специфичности, а к преобладающей форме вещества животного происхождения. Не модифицирована, тогда как РНКазы В, С и D представляют собой смеси гликоформ.

Благодаря своей доступности в больших количествах и высокой чистоте РНКаза А стала объектом эпохальных исследований в области химии белков и энзимологии. Кроме того, цитотоксические варианты и гомологи фермента продемонстрировали полезность в качестве химиотерапевтических средств.

Применение РНКазы А

• Удаление РНК из препаратов плазмидной и геномной ДНК;
• удаление РНК из препаратов рекомбинантных белков.

Комплект поставки: РНКаза А.

Условия хранения: -20 °С.

РНКаза А - эндорибонуклеаза, расщепляющая одноцепочечную РНК по цитозиновым и урациловым остаткам. Так как РНКаза А от Thermo Scientific не содержит ДНКаз, не требуется её термическая обработка перед использованием.

Области применения:

• Выделение плазмидной и геномной ДНК;
• удаление РНК из препаратов рекомбинантных белков;
• исследования защищённости от РНКаз (совместно с РНКазой Т);
• картирование 1-нуклеотидных мутаций в ДНК и РНК.

Рекомендуемая рабочая концентрация РНКазы А - от 1 до 100 мкг/мл. В присутствии NaCl в низких концетрациях (до 100 мМ) РНКаза А расщпляет 1- и 2-цепочечную РНК, а также цепь РНК в составе гибридов ДНК-РНК. В присутствии NaCl в концентрации 0.3М и выше РНКаза А расщепляет только 1-цепочечную РНК.

Условия хранения: -20^оС

Рекомбинантная РНКаза А — это фермент, полученный искусственным методом, путем встраивания гена РНКазы А в ДНК бактериальной клетки, которая затем начинает производить этот фермент. РНКаза А является эндорибонуклеазой, это фермент, расщепляющий РНК. В частности, она избирательно поражает 3'-концы остатков цитозина (C) или урацила (U) в РНК одноцепочечного типа, разрывая фосфодиэфирные соединения с соседствующими с ними нуклеотидами.

Наиболее активно рассекает однонитевую РНК. В растворах с малым содержанием соли (0-100 мМ NaCl) способна расщеплять однонитевую РНК, двухнитевую РНК и РНК в РНК-ДНК гибридах. В растворах с большой концентрацией соли (≥300 мМ NaCl) специфически разделяет одноцепочечную РНК.

Рекомбинантная РНКаза А часто применяется в лабораторных исследованиях, например, при выделении ДНК, где необходимо отделить РНК от образца. Также она используется в различных экспериментах по молекулярной биологии, где требуется специфическое расщепление РНК. Подходит для минимизации риска заражения патогенами при биопроизводстве, а также может быть применена в других молекулярно-биологических и клеточно-биологических исследованиях.

В реакциях, где РНК является критически важной (при синтезировании кДНК, обратной транскрипции, транскрипции и трансляции in vitro), рекомбинантные РНКазы используются для предотвращения деградации РНК, которая может быть вызвана присутствием других РНКаз в образце. Рекомбинантные РНКазы востребованы в различных исследовательских экспериментах, где требуется контроль над РНК, например, при изучении структуры и функции РНК, а также при создании рекомбинантных белков. В целом, рекомбинантные РНКазы являются важным инструментом в современной науке и биотехнологии, обеспечивая контроль над РНК и позволяя проводить различные манипуляции с нуклеиновыми кислотами.

Ген RNase A выделен из поджелудочной железы быка и экспрессирован рекомбинантно в пивных дрожжах. Производитель Servicebio строго контролирует полученный фермент на отсутствие активности неспецифических нуклеаз и протеаз.

Характеристики РНКаза А рекомбинантная/Recombinant RNase A

• Чистота, % — ≥95;
• ДНКаза — отсутствие;
• протеиназа — отсутствие;
• His-метка — наличие;
• концентрация, мг/мл — 10;
• хранение — при температуре -20 °C;
• транспортировка — c мокрым льдом;
• срок годности, мес. — 12.