Обратная транскрипция

Набор для синтеза кДНК с обратной транскриптазой HiScript III, с реактивом для удаления геномной ДНК содержит все компоненты, необходимые для синтеза высококачественной кДНК. В состав набора входит смесь ферментов HiScript III содержащая обратную транскриптазу HiScript III, оптимизированный буфер и ингибитор РНКаз,смесь RT, random гексапраймер и олиго(dT)₂₃VN праймер и реактив для быстрого удаления геномной ДНК.

Обратная транскриптаза HiScript III предназначенная для проведения эффективной реакции обратной транскрипции при 37 °С, обладает высокой термостабильностью, при проведении реакции обратной транскрипции по матрице РНК имеющей сложную вторичную структуру, температура реакции может быть повышена до 50 ~ 55 °С, без возникновения ингибирующего эффекта на синтез кДНК, также обладает превосходной способностью к длительному синтезу.

Реактив для удаления геномной ДНК может быстро удалять примеси ДНК в течение 2 минут.

Преимущества набора для синтеза кДНК с обратной транскриптазой HiScript III

• Обратная транскриптаза HiScriptIII имеет повышенную устойчивость к ингибиторам, обладает оптимальной активностью при 50-55 °С, обеспечивает эффективную обратную транскрипцию образцов со сложной вторичной структурой
• быстрое удаление геномной ДНК в течение 2 минут;
• различные типы праймеров для обратной транскрипции могут использоваться для различных экспериментов;
• применим для обратной транскрипции по матрице РНК животных, растений и микробов.

* Содержит ингибитор РНКаз

** Содержит dNTPs

Примечание: смесь RT (10×) содержит высокую концентрации дитиотреитола (DTT), который может выпадать в осадок при низкой температуре, в этом случае перед использованием нагрейте до комнатной температуры, осторожно встряхните и тщательно перемешайте, дождитесь повторного растворения осадка.

Условия хранения: -20 °С.

Набор для синтеза кДНК с обратной транскриптазой HiScript II содержит все компоненты, необходимые для синтеза высококачественной кДНК первой цепи. В состав набора входит 2-кратная смесь смесь ферментов HiScript II содержащая обратную транскриптазу HiScript II и ингибитор РНКаз, 2-кратную смесь RT, random гексапраймер и олиго(dT)₂₃VN праймер.

Обратная транскриптаза HiScript II — это новое поколение обратной транскриптазы вируса мышиного лейкоза Молони (обратная транскриптаза M-MLV (RNase H-)) с повышенной термостабильностью, устойчивостью к инигибиторам и эффективностью синтеза кДНК.

Олиго (dT)₂₃VN обладает более сильной связывающей способностью для полиА⁺ мРНК, чем Олиго(dT)₁₈, что делает обратную транскрипцию более эффективной. Олиго (dT)₂₃VN, random праймеры или генспецифические праймеры могут быть выбраны в качестве праймеров обратной транскрипции. Набор для синтеза кДНК с обратной транскриптазой HiScript II может быть использован для синтеза полноразмерной кДНК длиной до 20 кб, продукт пригоден для последующих ПЦР, кПЦР, клонирования и других последующих экспериментов.

Преимущества набора для синтеза кДНК с обратной транскриптазой HiScript II

• Содержит все компоненты необходимые для проведения реакции обратной транскрипции;
• широкий диапазон исходного количества матрицы, от 1 пг до 5 мкг общей РНК;
• амплификация фрагментов кДНК длиной до 20 тыс. п.н.;
• оптимальная активность обратной транскриптазы HiScript II при 50-55 °С; обеспечивает эффективную обратную транскрипцию образцов со сложной вторичной структурой;
• обратная транскриптаза HiScript II имеет устойчивость к большинству ингибиторов ОТ-ПЦР;
• широкий диапазон исходного количества матрицы, от 1 пг до 5 мкг общей РНК, и может амплифицировать фрагменты до 15 кб или более;
• синтезированная кДНК пригодна для последующих ПЦР, кПЦР, клонирования и других экспериментов.

* Содержит ингибитор РНКаз

** Содержит 1 мМ каждого dNTP

Условия хранения: -20 °С.

В этом продукте используется модифицированная мутантная обратная транскриптаза для синтеза первой цепи кДНК с тотальной РНК или мРНК в качестве матрицы для эффективной обратной транскрипции. Набор содержит все реагенты, необходимые для высококачественного синтеза первой цепи кДНК. SWEScript RT II (обратная транскриптаза) представляет собой мутантную обратную транскриптазу, основанную на обратной транскриптазе M-MLV. SWEScript RT II не имеет активности РНКазы H. По сравнению с ферментом дикого типа и первым поколением SweScript RT I во втором поколении SweScript RT II дополнительно улучшило термостабильность и эффективность синтеза кДНК.

Набор также содержит реагент GDNA Remover, который может быстро удалить остаточное загрязнение геномной ДНК с матриц РНК перед этапами обратной транскрипции, повышая надежность экспериментальных результатов и упрощая дизайн праймеров для количественной ПЦР без необходимости создания кросс-экзонного праймера.

Характеристики набора кДНК SweScript RT II

• Транспортировка – в мокром льду;
• срок годности – 12 месяцев;
• хранение – -20℃ .

MMLV–RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Она отличается от обратной транскриптазы MMLV дикого типа структурой, каталитическими свойствами и температурным оптимумом активности. Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. MMLV–RH проявляет оптимальную активность при +42°С (активна до +50°С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 10 т.н. и включать модифицированные основания.

Кроме обратной транскриптазы, набор содержит два типа буфера на основе KCl и (NH₄)₂SO₄, оптимизированные для проведения эффективной реакции обратной транскрипции с любых матриц РНК, в том числе содержащих участки повышенной сложности (сильно структурированные или GC-богатые).

Олиго(dT)₁₆ праймер и случайный гексапраймер позволяют более узконаправленно подходить к обратной транскрипции интересующих типов или участков РНК. Случайный гексапраймер неспецифически связывается с РНК-матрицей и используется для синтеза кДНК со всех типов РНК в составе суммарной РНК. Олиго(dT)₁₆ праймер селективно отжигается на полиадениновых последовательностях РНК, обеспечивая синтез кДНК только с мРНК, содержащих поли(А)-3’-конец. Также можно использовать специфичные праймеры для синтеза определённой последовательности.

Состав набора

* За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 1 нмоль dTMP в кислотонерастворимый продукт за 10 мин при +37 °С.

Супер-микс HiScript II Q RT SuperMix for qPCR специально разработан для 2-шаговой ОТ-кПЦР, содержит все компоненты, необходимые для проведения реакции обратной транскрипции, обратную транскриптазу HiScript II, ингибитор РНКаз, смесь dNTPs, смесь Random- и олиго(dT)20VN праймеров, а также реактив для удаления геномной ДНК gDNA wiper Mix.

Обратная транскриптаза HiScript II — это поколение обратной транскриптазы вируса мышиного лейкоза Молони (обратная транскриптаза M-MLV (RNase H-)) с повышенной термостабильностью и эффективностью синтеза кДНК.

Преимущества супер-микса HiScript II Q RT SuperMix for qPCR:

• Простая постановка реакции;
• эффективное удаление следовых количеств геномной ДНК, оставшихся в образце РНК;
• оптимальная активность обратной транскриптазы HiScript II при 50-55 °С обеспечивает эффективную обратную транскрипцию образцов со сложной вторичной структурой;
• обратная транскриптаза HiScript II устойчива к большинству ингибиторов ОТ-ПЦР;
• амплификация фрагментов кДНК длиной до 20 тыс. п.н.;
• синтезированная кДНК может использоваться в качестве матрицы непосредственно для проведения ПЦР в реальном времени.

* Состав супер-микса HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (5х): обратная транскриптаза HiScript II, ингибитор РНКаз, смесь dNTPs, смесь Random- и олиго(dT)20VN праймеров.

**Отрицательный контроль No RT Control не содержит обратную транскриптазу, используется для обнаружения наличия остаточной геномной ДНК в матрице РНК.

Супер-микс HiScript II Q RT SuperMix for qPCR специально разработан для 2-шаговой ОТ-кПЦР, содержит все компоненты, необходимые для проведения реакции обратной транскрипции, обратную транскриптазу HiScript II, ингибитор РНКаз, смесь dNTPs, смесь Random- и олиго(dT)₂₃VN праймеров. Для проведения обратной транскрипции необходимо добавить матричную РНК и H₂O. Объём матричной РНК может составлять до 80% от общего объёма, что очень подходит для реакции обратной транскрипции при низкой концентрации РНК.

Обратная транскриптаза HiScript II — это новое поколение обратной транскриптазы вируса мышиного лейкоза Молони (обратная транскриптаза M-MLV (RNase H-)) с повышенной термостабильностью и эффективностью синтеза кДНК.

Преимущества супер-микса HiScript II Q RT SuperMix for qPCR

• Простая постановка реакции;
• оптимальная активность обратной транскриптазы HiScript II при 50-55 °С; обеспечивает эффективную обратную транскрипцию образцов со сложной вторичной структурой;
• обратная транскриптаза HiScript II имеет устойчивость к большинству ингибиторов ОТ-ПЦР;
• амплификация фрагментов кДНК длиной до 20 тыс. п.н.;
• синтезированная кДНК совместимы для проведения ПЦР в реальном времени с SYBR или кПЦР на основе флуоресцентно-меченных зондов;
• соотношение Random- и олиго(dT)23VN праймеров оптимизировано для обеспечения синтеза кДНК в любой области матричной РНК и воспроизводимости результатов кПЦР.

* Состав супер-микса HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (5х): обратная транскриптаза HiScript II, ингибитор РНКаз, смесь dNTPs, смесь Random- и олиго(dT)₂₃VN праймеров, буфер для проведения реакции.

**Отрицательный контроль No RT Control содержит те же компоненты как супер-микс HiScript II Q RT SuperMix for qPCR (5х), за исключением обратной транскриптазы.

Условия хранения: -20 °С.

• 50 мM Трис-НCl, рН 8.0 (при +25 °С);
• 100 мM NaCl;
• MMLV-RH обратная транскриптаза;
• HS-Taq ДНК-полимераза;
• 1 мМ ЭДТА;
• 5 мМ дитиотреитол;
• 50% (v/v) глицерин;
• 0,1% (v/v) NP-40.

• 100 мM Трис-НCl, рН 8.3 (при +25 °С);
• 150 мM КCl;
• 0,6 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
• 10 мМ MgCl₂;
• 8 мМ дитиотреитол;
• интеркалирующий краситель SYBR Green I;
• инертный краситель;
• стабилизаторы и усилители активности ферментов.

• Высокая специфичность.
• Высокая чувствительность.
• Простота и удобство в использовании.
• Низкая ошибка пипетирования и вероятности кросс-контаминации.
• Стандартизация условий постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
• Возможность ТА-клонирования ПЦР-продуктов.

• Одношаговая стандартная ОТ-ПЦР.
• Количественный анализ РНК, в том числе анализ экспрессии генов.

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 тыс. п.н.
• Не рекомендуется использовать для ПЦР с флуоресцентными зондами.

• 50 мM Трис-НCl, рН 8.0 (при +25 °С);
• 100 мM NaCl;
• MMLV-RH обратная транскриптаза;
• HS-Taq ДНК-полимераза;
• 1 мМ ЭДТА;
• 5 мМ дитиотреитол;
• 50% (v/v) глицерин;
• 0,1% (v/v) NP-40.

• 100 мM Трис-НCl, рН 8.3 (при +25 °С);
• 150 мM КCl;
• 0,6 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
• 6 мМ MgCl₂;
• 8 мМ дитиотреитол;
• стабилизаторы и усилители активности ферментов;
• маркерные красители.

• Высокая специфичность.
• Высокая чувствительность.
• Простота и удобство в использовании.
• Низкая ошибка пипетирования и вероятности кросс-контаминации.
• Стандартизация условий постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
• Возможность ТА-клонирования ПЦР-продуктов.
• Сокращается стадия пробоподготовки для анализа результатов ПЦР - благодаря утяжеляющим добавкам и красителям, не требуется буфер для нанесения пробы на гель.

• Одношаговая стандартная ОТ-ПЦР.
• Анализ экспрессии генов.

Ингибитор РНКаз RiBond ингибирует рибонуклеазную активность эукариотических ферментов, таких как РНКаза A, РНКаза B, РНКаза C, и защищает РНК от неспецифического гидролиза. Представляет собой рекомбинантный белок массой 50 кДа, экспрессируемый в E.coli, предназначен для использования в приложениях, где присутствие РНКаз может снизить качество результатов экспериментов, например при выделении РНК, синтезе кДНК, ОТ-ПЦР, транскрипции и трансляции in vitro.

Условия хранения: -20 °С.

Мастер-микс ABScript III RT for qPCR — это готовая 5-кратная смесь, содержащая все реагенты, необходимые для проведения реакции обратной транскрипции, обратную транскриптазу ABScript III, ингибитор РНКаз, смесь dNTPs, смесь Random-праймера и олиго(dT)20VN праймера. Для постановки обратной транскрипции нужно только добавить в мастер-микс РНК-матрицу и H₂O. Обратная транскриптаза ABScript III — это генетически модифицированная обратная транскриптаза вируса лейкемии мышей (M-MuLV), не обладает активностью РНКазы H, проявляет оптимальную активность при 50- 55 °C, синтезирует кДНК длиной до 12 кб.

Преимущества мастер-микса ABScript III RT for qPCR

• Простая постановка реакции: нужно только добавить образец РНК к мастер-миксу;
• высокая эффективность обратной транскрипции: оптимальная активность при 50- 55 °C обеспечивает эффективную обратную транскрипцию образцов с низкой концентраций и сложной вторичной структурой;
• устойчивость к ингибиторам, таким как SDS и Тризол.

Состав мастер-микса ABScript III RT (5х): обратная транскриптаза ABScript III, ингибитор РНКаз, смесь Random-праймера и олиго(dT)20VN праймера, смесь dNTPs, буфер для проведения реакции с Mg²⁺.

Условия хранения: -20 °С.

Мастер-микс ABScript III RT for qPCR — это готовая 5-кратная смесь, содержащая все реагенты, необходимые для проведения реакции обратной транскрипции, обратную транскриптазу ABScript III, ингибитор РНКаз, смесь dNTPs, смесь Random-праймера и олиго(dT)20VN праймера. Для постановки обратной транскрипции нужно только добавить в мастер-микс РНК-матрицу и H₂O. Смесь gDNA Remover полностью удаляет примеси геномной ДНК в образце РНК. Обратная транскриптаза ABScript III — это генетически модифицированная обратная транскриптаза вируса лейкемии мышей (M-MuLV), не обладает активностью РНКазы H, проявляет оптимальную активность при 50-55 °С, синтезирует кДНК длиной до 12 кб. Мастер-микс ABScript III RT for qPCR специально оптимизирован для дальнейшей постановки кПЦР с использованием полученной кДНК, совместим с SYBR Green и флуоресцентно меченными зондами.

Преимущества мастер-микса ABScript III RT for qPCR

• Эффективное удаление геномной ДНК, оставшейся в образце РНК;
• удаление геномной ДНК и обратная транскрипция могут быть проведены в одной пробирке;
• оптимальная активность обратной транскриптазы ABScript III при 50- 55 °С; обеспечивает эффективную обратную транскрипцию образцов с низкой концентраций и сложной вторичной структурой;
• обратная транскриптаза ABScript III имеет устойчивость к ингибиторам, таким как SDS и Тризол.

* Состав мастер-микса ABScript III RT (5х): обратная транскриптаза ABScript III, ингибитор РНКаз, смесь dNTPs, смесь Random-праймера и олиго(dT)20VN праймера.

Условия хранения: -20 °С.

Набор iScript Select для синтеза длинных кДНК, Bio-Rad содержит оптимизированную смесь праймеров; простая подготовка реакции и малое время прохождения; высокая чувствительность – от 1 пг РНК; содержит все необходимые компоненты; размер синтезируемого продукта от 6 000 п.о. и более.

Набор с обратной транскриптазой RevertAid - полная система для эффективного синтеза первой цепи кДНК ан РНК-матрицах. В состав набора входит обратная рестриктаза RevertAid - рекомбинантная обратная транскриптаза вируса лейкемии мышей (M-MuLV-RT). Она активна при температурах от +42 до +50оС и способна синтезировать кДНК до 13 тыс. п.н.

В состав набора также входят: реакционный буфер, смесь дезокситрифосфатов, ингибитор РНКаз RiboLock, случайный 6-нуклеотидный праймер, олиго(дТ)18 праймер и контольный препарат - праймеры и матрица GAPDH.

Олиго(дТ)₁₈ праймер предназначен для специфического отжига на 3’-поли(А) матричной РНК. Для обратной транскрипции 5-концов РНК и РНК без поли(А)-концов используется случайный праймер.

Области применения:

• Синтез первой цепи кДНК в реакциях ОТ-ПЦР или ОТ-ПЦР в реальном времени;
• синтез полноразмерных библиотек кДНК;
• синтез антисмысловой РНК.

Условия хранения: -20^оС

Набор с обратной транскриптазой RevertAid - полная система для эффективного синтеза первой цепи кДНК ан РНК-матрицах. В состав набора входит обратная рестриктаза RevertAid - рекомбинантная обратная транскриптаза вируса лейкемии мышей (M-MuLV-RT). Она активна при температурах от +42 до +50оС и способна синтезировать кДНК до 13 тыс. п.н.

В состав набора также входят: реакционный буфер, смесь дезокситрифосфатов, ингибитор РНКаз RiboLock, случайный 6-нуклеотидный праймер, олиго(дТ)18 праймер и контольный препарат - праймеры и матрица GAPDH.

Олиго(дТ)18 праймер предназначен для специфического отжига на 3’-поли(А) матричной РНК. Для обратной транскрипции 5-концов РНК и РНК без поли(А)-концов используется случайный праймер.

Также возможно использование ген-специфичных праймеров. Первая цепь кДНК может быть использована как матрица в ПЦР, ПЦР в реальном времени или для синтеза второй цепи кДНК.

Условия хранения: -20^оС

Неспецифическая эндорибонуклеаза РНКаза H (рибонуклеаза H), специфически расщепляющая РНК в гибридных молекулах РНК: ДНК. Для активности требуется минимум четыре непрерывных пары оснований. РНКаза H гидролизует РНК с высвобождением 5'-олигорибонуклеотидов. Этот фермент не переваривает одно- или двухцепочечную ДНК.

Источник: штамм E. coli, несущий клонированный ген РНКазы H (rnh) из Escherichia coli.

Локализуется в ядре и цитоплазме. Повсеместно встречается и широко присутствует среди многих организмов, включая вирусы и человека.

Особенности и преимущества заключаются в том, что это вещество помогает устранять потенциальные источники ошибок ПЦР и увеличивает доступность праймеров во время последующей ПЦР.

Применение РНКазы H

• Удаление матрицы РНК во время синтеза второй цепи кДНК;
• удаление последовательностей поли(А) мРНК;
• обратная транскрипция.

Супермикс iScript RT Supermix, 25 rxns х 20 µl – готовая 5-кратная смесь для синтеза первой цепи кДНК. Содержит обратную транскриптазу MMLV-H⁺, ингибитор РНКаз, дезокситрифосфаты, смесь олиго-dT и случайного праймеров, MgCl₂ и стабилизирующие добавки.

Особенности обратной транскриптазы RevertAid

• cинтезирует первую цепь кДНК до 13 тыс п.н.;
• оптимальная температура реакции +42 °С;
• активна до +50 °С;
• способна встраивать модифицированные нуклеотиды — меченые Су3, Су5, родамином родамином или флюоресцеином.
  

Области применения обратной транскриптазы RevertAid

• синтез первой цепи кДНК в реакциях ОТ-ПЦР или ОТ-ПЦР в реальном времени;
• синтез кДНК для клонирования или экспрессии белков;
• мечение ДНК для микрочипов;
• анализ РНК с помощью праймер-экстеншн.

Экстра-микс для ОТ-кПЦР Real-RT-PCR (5x) – это готовая к использованию 5-кратная смесь предназначенная для анализа молекул РНК с помощью одностадийной ОТ-ПЦР. Экстра-микс Real-RT-PCR (5x) содержит смесь RTaq ДНК-полимеразы с горячим стартом, термостабильной обратной транскриптазы Smart RTT, dATP, dCTP, dGTP, dTTP и оптимизированного буферного раствора, содержащего MgCl2. Обратная транскриптаза Smart RTT обладает термостабильностью, отсутствием активности РНКазы Н и позволяет работать с РНК имеющей сложную вторичную структуру, синтезируя более протяженную кДНК, увеличивает специфичность и количество получаемой ДНК. Для проведения реакции ОТ-ПЦР в экстра-микс необходимо добавить РНК-матрицу, праймеры и при необходимости флуоресцентно-меченные зонды или интеркалирующий краситель. Оптимально подобранное соотношение ферментов и буферного раствора позволяют проводить мультиплексный анализ в одной пробирке.

Основные характеристики экстра-микса для ОТ-кПЦР Real-RT-PCR (5x)

• Простое и удобное проведение одностадийной ОТ-ПЦР;
• проведение обратной транскрипции по матрице РНК имеющей сложную вторичную структуру;
• пониженный риск контаминации за счет сокращения манипуляций при подготовке реакции;
• возможность проведения мультиплексной реакции в одной пробирке;
• удобство использования при анализе большого количества образцов.

Применение экстра-микса для ОТ-кПЦР Real-RT-PCR (5x)

• Одностадийная ОТ-ПЦР в реальном времени;
• мультиплексная одностадийная ОТ-ПЦР в реальном времени;
• анализ экспрессии генов;
• получение ПЦР-продуктов с возможностью клонирования в Т-вектора.

Комплект поставки экстра-микс для ОТ-кПЦР Real-RT-PCR (5x).

Условия хранения: -20 °С.

Основные характеристики обратной транскриптазы Maxima H minus

• термостабильность — температурный оптимум составляет от +50 до +60 °С, фермент сохраняет активность до 65 °С;
• отсутствие РНКазной активности позволяет синтезировать кДНК до 20 тыс. п.н.;
• высокая чувствительность и воспроизводимость — стартовое количество РНК может варьировать от 1 пг до 5 мкг;
• высокая эффективность — синтез полноразмерных кДНК занимает 15-30 минут;
• 50-кратная процессивность (по сравнению с ревертазой MMLV) обеспечивает устойчивость к ингибиторам-гуанидину, формамиду, этанолу;
• способна встраивать модифицированные нуклеотиды.