Магнитная сепарация клеток: принципы, схема, стратегия выбора, существующие решения

Разделение клеток – это не роскошь, а жизненная необходимость клеточной лаборатории.

Зачастую исследователи имеют дело не с монокультурой, а со смесью клеток (например кровь, клетки красного костного мозга). И возникает необходимость выделить клетки определенного типа для последующего изучения, культивирования или трансплантации.

На текущий момент существует несколько методов разделения клеток:

• Центрифугирование в градиенте плотности. Метод основан на седиментации различных типов клеток (разных по плотности), находящихся среде с градиентом плотности при центрифугировании. Этот метод достаточно прост, но не избирателен: клетки фракционируются в зависимости от их плотности, но не по фенотипу.
• Клеточный сортинг в потоке (FACS). Флуоресцентно-активированная сортировка клеток использует проточную цитометрию для идентификации и разделения клеток на основе морфологических параметров и экспрессии множества внеклеточных и внутриклеточных белков. Достаточно эффективный метод, но требует наличия дорогостоящего оборудования (клеточного сортера).
• Магнитный сортинг (MACS ― Magnetic Activated Cell Sorting). Разделение клеток с помощью магнитных микрочастиц: разделение включает связывание магнитных частиц с клетками-мишенями посредством взаимодействия аффинной молекулы с поверхностным маркером, с последующим разделением в магнитном поле. Достаточно простой дешевый метод, позволяющий выделить живые клетки определенного фенотипа.

Метод сепарации клеток на магнитных колонках (или магнитная активированная сортировка клеток, MACS ― Magnetic Activated Cell Sorting) ― это широко используемый метод выделения определённых типов клеток из сложной клеточной суспензии, например, крови или костного мозга. Данный метод основан на связывании специфических антител, нанесенных на магнитные микросферы, с рецепторами на мембране клеток, и последующего выделения нужной популяции, при помощи магнитного поля.

• Выделение стволовых клеток (например, CD34+ клеток при трансплантации костного мозга).
• Иммунофенотипирование.
• Исследования Т- и В-лимфоцитов, дендритных клеток, макрофагов и др.
• Подготовка клеток для культуральных систем и клеточной терапии.

Первопроходцем этого метода стала компания Miltenyi Biotec, которая завоевала большую популярность среди клеточных биологов, как во всём мире, так и в России. Популярность метод обрёл благодаря ряду преимуществ:

• Доступность: для изоляции субпопуляции клеток не требуется дорогостоящий сортер.
• Простота и быстрота: метод имеет достаточно простой протокол, с которым справится даже студент, который умеет правильно пипетировать.
• Высокая чистота и выход клеток: клетки остаются жизнеспособными (до 95C99%) и могут использоваться в дальнейших экспериментах (включая культивирование, трансплантацию и др.).

Компания RWD производит широкий перечень наборов, колонок и магнитных стендов. Основная особенность наборов и колонок RWD ― полная совместимость с наборами, колонками и магнитными стендами Miltenyi Biotec и STEMCELL.

Наборы для магнитной сепарации включают в себя высокоспецифичные антитела, которые позволяют проводить сепарацию клеток мыши или человека.

В зависимости от задач, компания RWD предлагает существует несколько вариаций метода:

• Наборы для позитивной селекции на магнитных колонках. В этом случае выделяются клетки человека или мыши, положительные по рецепторам CD45, CD3, CD4, CD8, CD19 или CD11b, помеченные магнитными частицами. Лишние клетки спокойно проходят через колонку.
• Наборы для негативной селекции на магнитных колонках. В этом случае с помощью магнитного поля удерживаются, наоборот, не желательные клетки. Клетки интереса не взаимодействуют с антителами, спокойно проходят через колонку и собираются в пробирку. Это наборы PanB-наборы для отбора B-лимфоцитов мыши ― функциональный тип лимфоцитов, играющих важную роль в обеспечении гуморального иммунитета. А также NK-наборы для отбора NK-клеток человека (цитотоксических лимфоцитов, участвующих в функционировании врождённого иммунитета).
• Наборы для негативной селекции без колонок. Такие наборы рассчитаны на удержание не нужных клеток в магнитном поле, но при этом используется не магнитная колонка, а обычная пробирка, установленная в кольцевой магнит. Как и в случае с негативной селекцией на колонке, ненужные клетки метятся антителами с магнитными частицами и удерживаются в магнитном поле на стенках пробирки. Нужные клетки оседают на дно пробирки и могут быть аспирированы пипеткой.

Сравнение методов магнитной сепарации клеток, с использованием колонок LarSep и без

	Магнитная сепарация на колонках LarSep	Магнитная сепарация без колонок
Рабочий комплект	Набор для магнитной сепарации. Сепаратор магнитный. Стенд для магнита. Колонка для магнитной сепарации LarSep.	Набор для магнитной сепарации. Штатив магнитный.
Затраты времени, мин	30-45	10-15
Метод сортировки	позитивный, негативный (NK-клетки, Pan-B	негативный
Видовая совместимость	человек, мышь	человек, мышь
Типы клеток	CD3+T, CD4+T, CD8+T, CD19+B, CD14+, CD34+, CD45+, CD11b+, Anti-FITC	Pan B, NK-клетки, Т-клетки, CD4+, CD19+, CD3+

Схема выбора метода магнитной сепарации RWD

Более подробную информацию о наборах и оборудовании для магнитной (и не только) сепарации, а также оформить заказ на продукты RWD для сепарации клеток, Вы можете посмотреть на нашем сайте.

См. также:

Ниже вы можете задать вопрос или оставить запрос в свободной форме:​