История
История
Эта публикация отражает содержание доклада «Проточная цитометрия в современной лаборатории: проточный цитометр 7S от BioSino», вошедшего в программу мультиконференции «Life Sciences, биотехнологии и аналитическая химия в современных условиях. Взгляд на Восток?», состоявшейся 9 ноября 2022 г. в Москве.
Специалист «Диаэм» Сергей Ирхин рассказал о новинке в аппаратном обеспечении проточной цитометрии — приборе от компании BioSino, получившем на российском рынке название 7S, который, несмотря на свою простоту, закрывает 90% потребностей лаборатории в том, что касается проточной цитометрии.
Этот прибор — один из видов продукции, найденной для замены ставших недоступными реактивов и оборудования для микробиологических лабораторий. Точно так же были найдены клеточные реактивы, пластик, антитела, микроскопы и системы визуализации у новых производителей, пришедших на смену компаниям, ушедшим с российского рынка.
Прибор позволяет реализовать основные базовые методы цитометрии, к нему прилагается простое в использовании программное обеспечение, и это позволяет приступить к использованию прибора даже пользователю, не обладающему значительным опытом в клеточном анализе. Следует отметить также доступную цену — всего 4.8 млн рублей, что недорого для такого класса оборудования.
Как и большинство проточных цитофлуориметров, 7S состоит из трех основных блоков:
В цитофлуориметре 7S реализована классическая система гидродинамической фокусировки. Он оснащен соплом диаметром 100 мкм. В приборе используется проточная жидкость, которая обжимает подаваемый образец, выстраивая клетки максимально близко к сечению пучка лазера (в данном случае он идет от параллельно взгляду читателя — от читателя на экран).
Это позволяет работать с образцами на разной скорости подачи в зависимости от того, насколько высока концентрация клеток, насколько слаб сигнал, сколько клеток в популяции пользователь ожидает увидеть.
Можно отрегулировать соотношение скоростей подачи образца и обжимающей жидкости, чтобы регулировать чувствительность системы и чистоту сбора данных.
Сбор отработанной жидкости происходит в контейнер для отходов. Эти контейнеры довольно компактные и занимают мало места: можно использовать штатные бутыли или использовать реагенты, поставляемые в специальных мешках-бутылях.
Флюидная часть довольно компактна. С прибором поставляется стандартный набор бутылей для фокусирующей жидкости, промывочной жидкости, shutdown solution и резервуара, куда все это стекает.
Забор образца происходит из стандартной цитометрической пробирки, которая устанавливается вручную. Минимальный объем забираемого образца составляет 90 мкл.
Если в лаборатории большой поток образцов, ручной сэмплер можно заменить на автоматический карусельный сэмплер емкостью 32 образца.
В приборе присутствуют всего один лазер с длиной волны 488 нм, набор дихроических зеркал и набор детекторов с детекцией по прямому и боковому светорассеянию, а также пять флуоресцентных детекторов (на схеме показано три, по факту пять).
Форму скаттера прямого светорассеяния определяет размер клетки, бокового — степень ее наполнения: клетка плотна по своей консистенции. Флуоресцентный репортный сигнал дает информацию о фенотипе. Так за счет комбинирования трех сигналов можно получить информацию о размере, структуре и фенотипе клетки.
Прибор, несмотря на то, что оснащен одним лазером, работает по пяти каналам детекции, а суммарно их семь: прямое и боковое светорассеяние — 2, и пять каналов флуоресцентной детекции:
На слайде приведены все основные красители, с которыми работают те или иные каналы детекции: FITC, фикоэритрин, пропидий йодид и тандемный краситель — два канала работают на «тандемнике».
Чувствительность довольно неплохая для прибора своего класса: FITC ≤150 MESF, PE ≤50 MESF, FSC чувствительность менее 1 мкм, при этом коэффициент вариации (CV) для всех каналов составляет менее 2%, что говорит о неплохой чувствительности.
Размер клеток от 0,5 до 50 мкм — это как раз ответ на вопрос по бактериальным клеткам: если размеры объектов сопоставимы с указанными значениями, то прибор для бактерий должен подойти.
Что касается чувствительности: на слайде приведены данные гистограммы по детекции молекулярных эквивалентов растворимого флуорохрома — по FITC и по фикоэритрину с анализом коэффициентов вариации по каналам — в принципе показатели, заявляемые производителем, довольно хорошие.
Прибор имеет достаточно простое программное обеспечение: по вкладкам есть «запуск прибора», «анализ данных», «редактирование протоколов», «настройки» и так далее.
На стартовом экране приведены окна, куда можно ввести всю информацию, указать количество событий, время анализа, минимальный объем, установить трэшхолды (пороги чувствительности).
Вкладка «Анализ» выводит гистограммы данных с результатом, при этом внизу указываются статусы всех модулей, которые участвовали в анализе: статусы подключения прибора, насоса, раствора, жидкости. Все это можно идентифицировать, и если что-то горит красным, пользователь может обратить внимание: вдруг что-либо пошло не так. Это удобно.
Рассмотрим конкретный пример использования вкладки анализа — в данном случае это данные по необработанному анализу крови, распределение по прямому и боковому рассеянию света, по размеру и консистенции клеток.
Все предыдущие результаты сохраняются в памяти компьютера: при необходимости можно из библиотеки вызвать нужные данные и обратиться к ним.
Программное обеспечение на текущий момент все еще на китайском и английском языках, но ведется работа по его переводу на русский язык, чтобы делать анализ максимально удобным для пользователей.
Для проверки заявленных производителем параметров через прибор «прогнали» четырехцветные микросферы и получили неплохой спектральный анализ: все эти группы были хорошо разделены по своим спектральным характеристикам с минимальным отклонением. Это подтверждает, что прибор довольно хорошо чувствует свои флуоресцентные каналы.
Также специалисты «Диаэм» провели тестирование на выделенных популяциях В- и Т- лимфоцитов — данные такого эксперимента тоже приведены.
Следует обратить внимание пользователей: это простой прибор, это не Beckman, не BD, но доступный прибор по доступной цене для лаборатории, которая только начинает заниматься клеточным анализом и испытывает острую потребность в оборудовании такого класса. В частности, не жалко и не страшно поставить прибор перед студентом, аспирантом, начинающим пользователем, чтобы он сам в нем разобрался, и уйти по своим делам.
Он прост в настройках, на первый взгляд производит приятное впечатление по обслуживанию: пользователю доступны все основные модули для обслуживания прибора, его флюидной части: промывка и съемка сопла, прочистка и т. д. Повторим, что и цена при этом довольно приятна.
Отвечая на вопросы пользователей, отметим: S7 нельзя доукомплектовать прибором для сортинга, но для сортинга по CD маркерам есть отдельно магнитный сепаратор: затратив примерно 38 тыс. рублей, можно организовать если не сортинг, то по крайней мере сепарацию. А вот по сортингу клеток у китайских производителей пока ничего толкового найти не удалось.
Если говорить о других предложениях по цитометрии и о привычных производителях, то на момент проведения мультиконференции ситуация с Bio-Rad и сортерами от этого производителя пока остается непонятной.
По обслуживанию приборов Bio-Rad пока нет никаких ограничений, запчасти к этой технике доступны, а вот с апгрейдом пока все очень непросто: ввоз лазеров в Россию не то чтобы невозможен, но очень усложнился. Поэтому все зависит от типа апгрейда.
Для установки новых лазеров может потребоваться юстировочный набор: в таком случае приезжает квалифицированный инженер, устанавливает лазер, юстирует, проводит несколько попыток при необходимости, в конце концов все устанавливается успешно. «Диаэм» как дистрибьютор Bio-Rad может оказать помощь по обновлению лазеров, но вопросы логистики и оформления документов будет решать непосредственно российское представительство Bio-Rad. И устанавливать лазер приедет инженер Bio-Rad.
Есть другой путь апгрейда — например, для приборов типа Beckman Coulter: у них по умолчанию все установлено сразу (все лазеры и фильтры), но для апгрейда нужно купить флешку. Поэтому, например, можно купить за 7 млн рублей прибор, «начиненный» на 16 млн рублей, но чтобы активировать все функции, нужно купить соответствующую флешку с ПО. Но Beckman Coulter пока недоступен, поэтому работа осуществляется с тем, что есть в наличии.
При понимании, что среди новых предложений есть не обязательно топовая техника, стоит признать, что для рутинных задач она вполне подходит.
В настоящее время у «Диаэм» есть антитела от Arigobio, Servicebio и ABclonal: если не нашли нужное антитело в одном каталоге, следует посмотреть в остальных — в каком-либо из имеющихся искомое точно есть.
Если говорить об окрашивании клеточных структур для визуализации ядер: под DAPI этот прибор не подходит, но с пропидий иодидом его вполне можно использовать.
Доступны наборы MTT, для оценки жизнеспособности клеток Calcein AM. Прибор можно использовать для различных анализов с наборами для оценки клеточной пролиферации Click-IT EdU по Alexa 488. Он отлично позволяет оценить пролиферацию, не говоря уже о наборах для оценки апоптоза TUNEL, Annexin, для определения апоптоза и клеточного цикла.
Следует напомнить пользователям о сайте «Диаэм», где в необходимом разделе можно ознакомиться с ассортиментом, ценами, наличием нужных реагентов. Это удобный путь получения коммерческого предложения, если оно требуется быстро.
Кроме того, следует отметить программу лектория «Диаэм», на сессиях которого специалисты знакомят пользователей с полезной информацией о продукции и ее применении.
Дополнительные вопросы о представленной продукции можно задать Сергею Ирхину:
по телефону +7(985) 929-67-28
или электронной почте sir@dia-m.ru.
Видео вебинара «Проточная цитометрия в современной лаборатории: проточный цитометр 7S от BioSino».
Новость о мультиконференции «Life Sciences, биотехнологии и аналитическая химия в современных условиях. Взгляд на Восток?»
Другие видео мультиконференции:
С помощью личного кабинета Вы сможете:
Сравнение
