История
История
Содержание статьи:
Компания Thermo FS имеет очень богатый опыт в области микробиологии – как и компании, которые в свое время присоединились к ней и сейчас вместе представляют линии продуктов для микробиологических исследований.
Так, Oxoid, основанная в 1924-м и с 20-х годов прошлого века производившая различную продукцию, имеет многолетнюю специализацию в микробиологии и за счет этого хорошо узнаваема на рынке. Узнаваемо и высокое качество продукции Oxoid, ставшей частью Thermo FS в 2006 г.
Компания Remel (Regional Media Laboratories) с 1973 г. находится на рынке микробиологической продукции; эта американская компания специализируется в основном на готовых средах и отдельных реагентах для иммунодиагностики. Частью Thermo FS она стала в 2006 г.
TREK Diagnostic Systems со своим оборудованием Sensititre известна с 1986 г. и специализируется на исследованиях по антибиотикочувствительности. Компания вошла в Thermo FS в 2011 г.
Такое богатое наследие в области микробиологии обеспечивает отличное качество и поддержку микробиологов по всему миру
Для исследований в пищевой лаборатории и детекции различных патогенов применяются определенные методики. Процесс разделен на этапы. Для каждого такого этапа протокола Thermo FS предлагает оборудование и реагентику – от момента отбора проб до этапа подтверждения и идентификации.
Среди продукции ThermoFisher Scientific – различные зонды для взятия проб, контактные чашки, бульоны предобогащения в готовых и сухих форматах, а также готовые сухие среды, контрольные штаммы и все, что необходимо для работы с образцами: дилютеры, гомогенизаторы. Для детекции и подсчета тоже есть свои предложения, в том числе системы ПЦР для детекции патогенов на молекулярном уровне. Есть среды и реагенты для детекции и подсчета бактерий, латексные наборы для подтверждения; доступна биохимическая и серологическая идентификация. А также компания предлагает карточки O.B.I.S. для колориметрического подтверждения – тоже достаточно быстрый метод последнего этапа подтверждения, который валидирован для применения с альтернативными методами.
С этой продукцией можно проводить тесты, будучи уверенными в результате.
1. Среды соответствуют стандартам ISO по детекции пищевых патогенов. Область пищевого тестирования регламентирована, а все тестирования основаны на соответствующих стандартах и нормативных документах. Поэтому очень важно, чтобы продукция, которая используется для детекции той или иной бактерии, обязательно соответствовала стандартам. Среды, которые предлагает ThermoFS, соответствуют стандартам ISO. А в нашем случае эти стандарты ISO также являются шаблонными и для ГОСТов, которые пишутся в России. Например, существует ISO 6579 – горизонтальный метод детекции сальмонелл, но есть и ГОСТ, соответствующий данному ISO.
Для каждого этапа тестирования – от предобогащения, далее селективного обогащения, выделения, пересева на неселективный агар, подтверждения, серологического подтверждения – Thermo FS может предложить свою продукцию.
Кроме того, есть определенные методические материалы, специальные брошюры для каждого ISO, разделенные по патогенам, в них указано, какие среды и какие реагенты компания может предложить в том или ином случае.
2. Уверенность в результате дает то, что исследователь работает только с качественными средами. Thermo FS самостоятельно готовит сырье из высококлассных материалов на собственном заводе в Великобритании, а значит – целиком несет ответственность за качество своих сред и сопутствующей продукции, различных добавок, сапплементов. То есть гарантия качества основана на том, что даже сырье, используемое для приготовления сред, Thermo FS готовит сам.
Для получения нужного результата, особенно если есть некие сложности с идентификацией тех или иных микроорганизмов, сложности в технических моментах, с подготовкой сред, тратится время на различные шаги в подготовке реагентов. Для лаборатории важно сокращать трудозатраты и оптимизировать процессы по времени, чтобы получать результаты быстрее и проще. Для этого можно использовать специальные экспресс-решения, которые тоже предлагает Thermo FS. Это новые форматы, новые улучшенные реагенты и экосистемы для детекции патогенов –Quick Bag, Brilliance Agar, RapID, штаммы Culti-loops.
Это очень важная составляющая в обеспечении детекции патогенов в пищевых продуктах, так как сначала бактерии нужно «оживить». Исследуемый образец предобогащается, и для заготовки бульона, используемого в этом процессе, требуется время: если бульон готовится из сухой среды, то нужно все отмерить, смешать, это довольно трудозатратно.
Thermo FS предлагает формат продукции, который позволяет быстро и просто получить готовый бульон в необходимом объеме. Бульоны новых форматов Dry-Bag, Fit-Bag и Quick-Bag уже гамма-облучены, стерилизованы и их не нужно автоклавировать. Они готовятся за 3-10 минут, их можно хранить при комнатной температуре, что немаловажно. Срок годности такой продукции составляет 2 года, а после добавления воды они пригодны к использованию в течение 10 дней.
Есть форматы, которые готовы к наполнению – Dry-Bag и Fit-Bag, есть уже залитый водой Quick-Bag.
Например, Fit-Bag (изображен на слайде) – это пакет с двумя секциями: в одной находится сухая среда, а вторая секция пустая. Способ приготовления заключается в том, что пользователь сначала ставит фильтр, наполняет водой незаполненную секцию, а далее просто нужно нажать на пакет с двух сторон, чтобы мембрана, разделяющая две секции, порвалась. Несколько нажатий на пакет и перемешивание в течение буквально пары минут – и далее можно подключать пакет к дилютеру, наливать просто в пакет для предобогащения и использовать этот бульон. Сразу весь объем задействовать необязательно: можно взять столько, сколько нужно для конкретного исследования, а остальное оставить на потом, ведь срок хранения составляет 10 дней после добавления воды. После полного использования бульона пакет необходимо утилизировать.
Объемы пакетов разнообразны: есть на 2.7 л, на 4.5 л, на 9 л и 20 л.
Самый быстрый формат – уже залитый водой Quick-Bag. Это пакетик из двух секций, в одной находится сухая среда, в другой – уже залитая вода. Для подготовки к использованию нужно только нажать на пакет с двух сторон там, где находится вода, чтобы мембрана, разделяющая секции, порвалась и вода смешалась со средой. Перемешивание в течение 1.5 – 2 минут – и все готово к использованию. Это очень просто и быстро, готовый бульон предобогащения всегда есть под рукой. В таком формате есть и забуференная пептонная вода, и триптон-соевый бульон, и специальный бульон для листерий.
Это предлагаемое ThermoFS экспресс-решение. Применение этих сред относится к альтернативным методам детекции патогенов в пище. Альтернативные методы сертифицируются специальными организациями в соответствии со стандартом ISO 16140 в сравнении с классическим методом.
Хромогенные среды Brilliance сертифицированы AFNOR и AOAC в соответствии с указанным стандартом. Все данные о валидации у компании есть, как и протоколы валидации. Если пользователя интересует, на какие матрицы были валидированы данные среды и методы детекции, то такую информацию Thermo FS тоже может предоставить.
Хромогенные среды как альтернативный метод существенно ускоряют работу, так как требуется всего один бульон, одна чашка и один латексный тест, в то время как для классического метода нужно зачастую несколько бульонов, пересевание на чашку, один или два метода подтверждения.
Здесь протокол существенно проще и быстрее. Пример рассматривает исследования по сальмонелле: сначала сальмонеллу предобогащают бульоном One Broth, высевают далее на чашке Brilliance Salmonella, затем после высевания – после вторых суток – берут характерные колонии и подтверждают с Oxoid Salmonella латексным тестом. Таким образом результаты получают за два дня.
Четкие цветовые различия колоний обеспечиваются за счет хромогенных субстратов. Преимущество хромогенных сред Brilliance заключается еще и в использовании технологии Inhibigen – специальных молекул для ингибирования и подавления сторонней микрофлоры. Технология основана на специфичных химических реакциях клеток микроорганизмов. Она позволяет подавить стороннюю микрофлору и уменьшить стресс на целевой организм. В некоторых других средах используются антибиотики, их действие может быть более широким, и в то время как препарат может воздействовать еще и на целевую бактерию, новая технология Inhibigen позволяет и подавить стороннюю микрофлору, и уменьшить стресс на целевой организм, что ведет к повышению чувствительности среды и к увеличению выделения целевой бактерии.
Для хромогенных сред предложение по таким средам достаточно обширно: есть на листерии, сальмонеллу, стафилококки, e. coli, колиформы, кампилобактерии, Bacillus cereus, Enterobacter sakazakii, а также есть среды для детекции e. coli и колиформ в воде методом фильтрации.
Это быстрое решение Thermo FS, предлагаемое для идентификации микроорганизмов.
Панели Rap ID удобны тем, что позволяют четырехчасовую аэробную инкубацию для всех микроорганизмов – и для аэробов, и для анаэробов – в обычном инкубаторе. Это возможно благодаря использованию специальной ферментной технологии в субстратах, которые находятся на панели.
Применение Rap ID предусматривает одношаговую инокуляцию: не обязательно добавлять суспензию бактерий в каждую лунку (а лунок на панели много) –инокулят добавляется в одно отверстие на панели справа наверху, после чего он распределяется по всем лункам.
После инкубации панель нужно достать и произвести считывание результата, то есть проанализировать прохождение характерных цветовых реакций. Лунки изменяют цвет, и по характерному изменению цвета можно сделать вывод о том, какая бактерия здесь находится. Каждой лунке присваивается определенное числовое значение, которое будет прописано на цветовых карточках, поставляемых с этим набором. Эти значения складываются, после чего выносится вердикт о том, какой микроорганизм здесь был.
Детекция бактерий осуществляется с помощью разных сахаров, каждый из которых поглощается (ферментируется) или не поглощается разными видами бактерий. Хромогенные субстраты в лунках реагируют на наличие этой ферментации, при ее наличии цвет лунки изменяется. Поставляемые с набором карточки, где каждой лунке с положительной реакцией присвоено определенное числовое значение, позволяют суммировать такие значения и по сумме определить, какому микроорганизму соответствует значение суммарного числа. Например, для идентификации бактерии e. coli после высевания на чашку отбираются характерные колонии, разводятся водой, из них готовится суспензия, она инкубируется на такой панели, а потом после инкубации производится считывание результата.
Конечно, есть вероятность того, что в пробу случайным образом могут попасть несколько видов бактерий сразу и сформировать нехарактерную реакцию. Но эту вероятность можно снизить за счет использования более качественных и селективных сред перед моментом идентификации.
Колонии исследователь получает на чашке и берет для идентификации характерные – по определенным признакам соответствующие целевому микроорганизму. С Rad ID и хромогенными средами определить целевую бактерию можно даже быстрее и проще, так как колонии будут окрашены в хромогенной среде в определенный цвет. Если взять эти характерные колонии и проанализировать на панелях, уверенность в малой вероятности попадания нецелевых бактерий будет выше, и основана она на использовании более чувствительных сред перед этой идентификацией.
Пользователи интересуются, могут ли две схожие колонии быть приняты за одну одинаковую, а в результате окажется, что упущен из виду опасный штамм. Однако условный тест производится на панели, на которой есть несколько лунок с разными тестами: определенные лунки изменением окраски показывают наличие именно тех бактерий, которые ищет пользователь, другие же говорят о наличии чего-то еще. Например, если используется панель на стафилококки, там присутствуют лунки, которые позволят понять по характерной цветовой реакции, что это не только стафилококк, а какая-то сторонняя бактерия присутствует в образце дополнительно.
«Расшифровку» результатов можно делать и в специальной бесплатной программе, и в которую вводятся значения для каждой лунки – затем программа сама выводит на экран, какой где был микроорганизм. При внесении данных в программу она укажет на то, что в определенных лунках реакции прошли и свидетельствуют о наличии некой другой бактерии. Тогда нужно провести дополнительные исследования по выделению целевой бактерии – все вернется к моменту выделения.
Именно в момент выделения и должна устраняться проблема риска, что в одну суспензию попадут несколько микроорганизмов. В этом случае следует отметить пользу технологии Inhibigen с ее способностью подавить стороннюю микрофлору. Она позволяет уменьшить количество случаев, когда похожие колонии на чашке дают непонятный результат и можно эти колонии спутать. Технология Inhibigen как раз и позволяет подавить стороннюю микрофлору и увеличить рост целевой бактерии. Эта технология эффективно используется с хромогенными средами.
Панели Rap ID существуют для идентификации дрожжей и грибов, для стафилококков, энтеробактерий, листерий – их выбор достаточно велик. Эти панели хороши и как отдельный вид исследования, и как дополнение к автоматическим системам для бактериальной идентификации.
Даже если в лаборатории есть автоматический баканализатор, то всегда важно иметь какое-то подручное средство, чтобы быстро что-то перепроверить и быть уверенным в результате. Автоматические системы могут периодически сбиваться, выходить из строя, и такие «ручные» панели имеют неоспоримое преимущество – позволяют быстро проверить что-либо на всякий случай.
Конечно, при использовании классических методов для рядовой идентификации микроорганизмов всегда используется комплекс тестов: для видовой идентификации нужны микроскопирование, определение, к грамположительным или грамотрицательным относятся бактерии, и так далее. Судить о видовой принадлежности одной бактерии нельзя по единственному тесту. Методы биохимической идентификации дополняются другими: микроскопическими, окраской по Граму, серологическими. Все это применяется там, где регламентировано, и о существовании множества методов идентификации микроорганизмов следует помнить. Разумеется, нельзя только по биохимической панели нельзя судить о том, с каким видом бактерии столкнулся исследователь, всегда нужен комплекс методов.
Контрольные штаммы необходимы в любой лаборатории, будь то пищевое тестирование или иные исследования. Thermo FS поставляет обширный диапазон штаммов – более 500 микроорганизмов из коллекции ATCC (американской коллекции типовых культур).
Штаммы Culti-Loops – это экспресс-формат в виде индивидуально упакованных петель одного микроорганизма, которые быстро используются без дополнительной подготовки. Нужно просто вскрыть упаковку, приложить петлю к подогретому агару, сделать «газон» и поставить в инкубатор. Это можно проделать буквально за минуту, поставить инкубироваться и получить рост.
Такая экспресс-методика существует за счет повышенной жизнеспособности и восстанавливаемости культур, находящихся в гелевом консервирующем реагенте в этой петле. Когда петля прикладывается к теплому агару, высеваются микроорганизмы; они активизируются, за счет этого достигается хороший рост.
С помощью личного кабинета Вы сможете:
Сравнение
